Влияние растительного лектина Вискумин на макрофаги, полученные из THP-1

Растительный лектин вискумин является токсином, относящимся к семейству RIPII белков. A-цепь токсина специфически гидролизует гликозидную связь в позиции аденозина 4324 в 28S рибосомальной РНК, вызывая остановку синтеза белка в клетках. B-цепь токсина связывает специфические гликозидные остатки на поверхности клетки и опосредует эндоцитоз токсина внутрь клетки. Цитотоксический эффект вискумина значительно варьирует между разными клеточными линиями, причем клетки гемопоэтического происхождения оказываются наиболее чувствительными. Таким образом, целью данного исследования являлось изучение цитотоксического эффекта вискумина на провоспалительные макрофаги, полученные из клеточной линии острого моноцитарного лейкоза THP-1. Показано, что 50% ингибирование жизнеспособности макрофагов, измеренное методом МТТ, достигается при концентрации вискумина 4.3 нМ, что на 3 порядка меньше, чем для устойчивых линий по литературным данным. При этом, показано, что гиперчувствительность макрофагов к токсину не связана с количеством сайтов связывания к вискумину на поверхности клетки. Количество сайтов связывания на макрофагах, оцененное методом проточной цитометрии, составляет не более 2 миллионов на клетку. Это в 16 раз меньше, чем количество сайтов связывания для рицина (родственного токсина из семейства RIPII, использующего такой же гликозидный остаток для эндоцитоза) на резистентных к RIPII токсинам клеточных линиях. Также показано, что при 6-часовой инкубации при избыточной концентрации вискумина (100 нм) доля внутриклеточного токсина составляет 8% от количества, попавшего внутрь клетки за первые 30 минут. При этом, показано, что это количество А-цепей токсина приводит к инактивации лишь 6.5% рибосом, детектируемых с помощью ПЦР; а доля жизнеспособных клеток составляет менее 20%. Однако, литературные данные показывают, что инактивация 20% рибосом в клеточной линии Caco-2, являющейся резистентной к вискумину, не приводит к значимому снижению жизнеспособности. Эти результаты предполагают, что в повышенную чувствительность клеток к токсину наибольший вклад вносят иные клеточные механизмы, нежели фактическая остановка трансляции.