Увеличение чувствительности клеточных линий к трансдукции AAV9 с помощью экзогенной экспрессии рецепторов к вирусной частице

Вектор на основе аденоассоциированного вируса серотипа 9 (AAV9) является ведущей платформой для доставки генов для лечения различных заболеваний человека на данный момент. Особенности структуры и свойства AAV9 придают ему уникальные качества, которые делают его перспективным кандидатом для применения в генной терапии. AAV9 отличается высокой специфичностью к мышечным тканям, в том числе к сердечной мышце, а также обладает способностью эффективно преодолевать гематоэнцефалический барьер, что значительно расширяет возможности его использования в лечении заболеваний, связанных с дефектами центральной нервной системы, мышечными и сердечными нарушениями. Несмотря на результаты, демонстрируемые этим вектором в экспериментах in vivo, где он проявляет высокую эффективность в трансдукции клеток, AAV9 плохо трансдуцирует клеточные линии in vitro. Это стало причиной отсутствия на сегодняшний день адекватной клеточной модели для тестирования препаратов на основе AAV9, что затрудняет дальнейшее развитие в этой области. Для решения представленной проблемы в рамках данной дипломной работы был использован один из подходов к решению этой задачи. Целью исследования является увеличение чувствительности клеточной линии HEK293Т к трансдукции AAV9 при помощи экзогенной экспрессии рецепторов вирусной частицы в клетках. В рамках проведенного исследования была оценена эффективность трансдукции AAV9 в сравнении с другими серотипами AAV на клеточной линии HEK293T, на основе литературного анализа выбраны кандидатные рецепторы, потенциально увеличивающие трансдукцию AAV9, гены которых были клонированы в векторы с репортерной системой, и после достижения оверэкспресии в клетках были выбраны рецепторы, увеличивающие трансдукцию AAV9 в клеточной линии HEK293T, в условиях транзиентной экспрессии. Таким образом, в результате исследования был обнаружен рецептор KIAA0319L, чья экзогенная экспрессия значительно увеличивала уровень трансдукции AAV9 в клетках линии HEK293T. Полученные данные могут послужить отправной точкой для дальнейших исследований, направленных на изучение влияния оверэкспрессии KIAA0319L на трансдукцию AAV9 в других клеточных линиях. Например, в линии миобластов мыши C2C12, широко применяемой для проверки генетических методов лечения мышечных заболеваний, и дальнейшего создания стабильных клеточных линий, высокоэкспрессирующих данный рецептор для эффективной трансдукции AAV9.