Сравнительный анализ эффективности инсерции в геном клеток CHO генетических кассет при негомологичной рекомбинации и интеграции транспозазой PiggyBac

Промышленное получение рекомбинантного белка в клетках яичника китайского хомячка (CHO) в настоящее время осуществляется разными способами, в частности, методом геномной амплификации под действием метотрексата (MTX). Тем не менее, у данного подхода есть существенные минусы. Возможным решением является использование систем доставки транспозонов. Целью работы является проведение анализ эффективности инсерции в геном клеток CHO генетических кассет с промоторной областью гена EEF1A1 при негомологичной рекомбинации и интеграции транспозазой PiggyBac. Задачами работы являются: 1) разработка и получение конструкций, содержащих генетические кассеты с промоторной областью гена EEF1A1 и инвертированные повторы системы PiggyBac; 2) трансфекция клеток CHO полученными основной плазмидой и вспомогательной плазмидой, содержащей транспозазу PiggyBac; 3) проведение геномной амплификации под действием MTX; 4) анализ эффективности экспрессии белка при негомологичной рекомбинации и интеграции транспозазой PiggyBac: измерение относительного количества GFP в клетках и числа копий встроенного гена. Ожидается, что эффективность получения GFP с использованием системы PiggyBac будет выше, чем при обычной селекции с помощью MTX.